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常见问题
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  • 上下槽缓冲液有何要求,怎样才能达到最佳效果。

    无特殊要求。但ca88国际平台一般是上槽放新鲜的缓冲液,下槽可以是重复使用过一两次的缓冲液。

  • 做 WesternBlot 时,同样的抗体免疫组化能做出,而WesternBlot 却不能?

    这多半是抗体的问题,要看抗体的说明,是否能做 WesternBlot 和免疫组化。

  • 如果是 6×8 转印膜,要加多少一抗?

    一抗的稀释度是有说明的,根据你的一抗看看就知道了,但是那么大的膜孵育体积一般最少为3- 5ml

  • 转膜后经丽春红染色的条带,为啥大蛋白分子的一端的转膜好象不是很好,为啥?

    这是正常的,大分子的蛋白转移的慢,你延长转移时间和电流,大分子一端就会好的多,但是小分 子的就有可能会变淡。

  • 检测同一抗体的磷酸化和非磷酸化的抗原可以在同一张膜上吗?

    可以。

  • 在做 WesternBlot 时,PVDF 膜用甲醇浸泡的目的?

    PVDF 膜用甲醇泡的目的是为了活化 PVDF 膜上面的正电基团,使它更容易跟带负电的蛋白质结 合,做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。

  • 免疫组化和WesternBlot 可以用同一种抗体吗?

    免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇(又称表位),有些表位是线性的,而有的属 于构象型;线性表位不受蛋白变性的影响,天然蛋白和煮后的蛋白都含有;构象型表位由于受蛋白空间 结构限制,煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸,也就是线性表位, 那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western,而如果抗体识别构象形表位,则只能用于免疫组化。

  • 要做磷酸化某因子 WesternBlot,其二抗有何要求?

    对二抗无要求,要看你实验条件来选择,一般推荐用HRP 标记的二抗。

  • WesternBlot 中抗体的可以重复应用吗?

    抗体工作溶液一般不主张储存反复使用,但是如抗体比较珍贵,可反复使用2-3 次。稀释 后应在 2-3 天内使用,4 度保存,避免反复冻融。

  • 一抗,二抗的比例是否重要?

    比较重要,调整好一抗,二抗的比例,可以去掉部分非特异的本底。

  • 蛋白的上样量有没有什么具体的要求?

    上样量要根据实验的要求来定, 如果要求是定量和半定量的WesternBlot 则上样量要均等,如 果只是要定性,则没有太大的关系,尽量多上就行了,但是不要超载。

  • 有什么方法可以提高上样量?

    a)可以浓缩样品;增大上样体积来增大上样量;

    b)用5 倍的上样缓冲液来稀释变性

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